PCR實(shí)驗(yàn)是專門用來檢驗(yàn)艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測(cè)手段。PCR(Polymerase Chain Reaction)即 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),又稱無細(xì)胞分子克隆系統(tǒng)或體外酶促基因擴(kuò)增法。是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,也是生物學(xué)、醫(yī)學(xué)臨床等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。PCR實(shí)驗(yàn)又稱臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn),通過將病毒體內(nèi)所含的基因進(jìn)行擴(kuò)增,即將微量的DNA大幅增加,以測(cè)出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。
一、實(shí)驗(yàn)室布局形式
(一)分散式
各實(shí)驗(yàn)用房彼此相距較遠(yuǎn),呈分散布置形式。
各實(shí)驗(yàn)之間不易相互干擾。
除各實(shí)驗(yàn)室自身做好防護(hù),防止外界環(huán)境對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響外,其它無特殊條件要求。
(二)組合式
完成PCR四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)用房相鄰布置,形成集中、獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)域。
每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置獨(dú)立緩沖間、實(shí)驗(yàn)室間應(yīng)設(shè)置帶消毒裝置的傳遞窗。
二、實(shí)驗(yàn)室功能房間主要功能和儀器配置清單
(一)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)
試劑的制備和貯存,試劑的分裝,主反應(yīng)混合液的制備。儀器有2-8℃和-15℃冰箱、混勻器、微量加樣器(覆蓋1-1000ul)、移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)、專用工作服和工作鞋、專用辦公用品。
(二)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)
核酸(RNA、DNA)提取、貯存擴(kuò)增反應(yīng)管的制作。儀器有2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)、混勻器、水浴箱或加熱模塊、微量加樣器(覆蓋1-1000ul)、可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)、生物安全柜、一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)、專用工作服和工作鞋、專用辦公用品、如需處理大分子DNA,應(yīng)具有超聲波水浴儀。
(三)擴(kuò)增反應(yīng)混合物配置和擴(kuò)增區(qū)
DNA或cDNA擴(kuò)增。核酸擴(kuò)增儀、微量加樣器(覆蓋1-1000ul)、可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)、一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)、專用工作服和工作鞋、專用辦公用品。
(四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)
擴(kuò)增片段的測(cè)定。視檢驗(yàn)方法不同而定。基本儀器有微量加樣器(覆蓋1-1000ul)、可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)、一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭(帶濾心)、專用工作服、工作鞋、專用辦公用品。
三、PCR實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)與空調(diào)系統(tǒng)設(shè)計(jì)
(一)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范
《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》
《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》 GB50346-2011
《臨床基因擴(kuò)增(PCR)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范》
(二)實(shí)驗(yàn)室暖通設(shè)計(jì)參數(shù)
(三)實(shí)驗(yàn)室氣流流向設(shè)計(jì)
為避免交叉污染,PCR實(shí)驗(yàn)室空氣流向必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行,即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。氣流組織采用上送下排,送風(fēng)口和排風(fēng)口布置應(yīng)使室內(nèi)氣流停滯的空間降低到最小程度。在生物安全柜操作面或其他有氣溶膠操作地點(diǎn)的上方附近不得設(shè)送風(fēng)口。高效過濾器排風(fēng)口應(yīng)設(shè)在室內(nèi)被污染風(fēng)險(xiǎn)最高的區(qū)域,單向布置,不得有障礙。
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